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在使用核酸提取磁珠时这些问题你都知道么

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  在核酸检测过程中,核酸提取磁珠因检测灵敏度高、操作可自动化、高通量、安全和快速等特性,被广泛应用。但在核酸提取过程中,需要注意的细节较多,一处出错都会导致结果的失败,下文帮大家整理出了一些常见问题并进行解答,希望对你会有帮助。
 
  1、增加磁珠的用量,可以改善核酸提取效率吗?
 
  在提取效果不佳的时候,有人会认为增加磁珠的用量,就能吸上更多的核酸,提高核酸提取量,但其实这种方法很难达到目的。
 
  磁珠用量过多,会导致其无法均匀分散到各步溶液体系中,降低其分散性,导致吸附、洗涤和洗脱过程的不全。过量的磁珠也会吸附更多的杂质,磁珠表面没有结合核酸的位点,会给杂质的结合提供更多机会。一般情况下,磁珠法核酸提取试剂盒中给出的磁珠用量都足够满足大家常见的应用场景,如果遇到核酸提取收率低的问题,需要对裂解结合、清洗和洗脱过程等方面充分考虑。
 
  2、如何避免核酸提取过程中核酸降解?
 
  每个步骤都要注意充分的混合均匀,避免团块的残留影响实验结果;在洗脱时,时间过长或者温度过高,核酸有可能会降解;样本切记不可反复冻融,提取的样本要注意在合适的温度保存,长期保存尽量 -80 ℃。
 
  3、样品裂解效果不好,能否通过增加裂解液使用量,改善裂解效果并提升提取效果?
 
  对于磁珠法而言,每增加一部分液体体积,就减少了更多的磁珠碰撞几率,而降低磁珠碰撞几率,会导致吸附率的大幅度下降。所以很多时候,虽然增加裂解液和洗涤液确实能够起到增强裂解和增强洗涤的作用,但磁珠法提取的核心是磁珠吸附核酸的效率,无法保证磁珠碰撞效率是不能保证核酸提取效率的,所以单纯增加试剂使用量改善提取效果并不一定全有效。
 
  4、核酸提取纯度不高,有蛋白或盐残留,是否清洗次数越多越好?
 
  核酸提取纯度不高,可适当增加一到两次清洗次数。如果清洗次数过多,会增加清洗过程中的核酸损失量。一般情况下,清洗次数在2-4次为宜。
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